Powered by OpenAIRE graph
Found an issue? Give us feedback
addClaim

การแสดงออกของรีคอมบิแนนท์โปรตีน VP1 และ VP2 จากไวรัสก่อโรคโลหิตจางในไก่ใน Escherichia coli และการผลิตแอนติบอดี

การแสดงออกของรีคอมบิแนนท์โปรตีน VP1 และ VP2 จากไวรัสก่อโรคโลหิตจางในไก่ใน Escherichia coli และการผลิตแอนติบอดี

Abstract

โรคโลหิตจางในไก่เป็นโรคที่ทำให้ไก่เกิดภาวะโลหิตจางชนิดรุนแรงและส่งผลให้การทำงานของระบบภูมิคุ้มกันลดต่ำลงซึ่งสาเหตุสำคัญเกิดจากการติดเชื้อไวรัสก่อโรคโลหิตจางในไก่ (Chicken Anemia Virus, CAV) โปรตีน VP1 ซึ่งเป็นโปรตีนหลักของเชื้อไวรัส CAV ด้วยคุณสมบัติในการเป็นแอนติเจนที่สูงสามารถถูกจดจำได้ดีจึงถูกนำไปใช้พัฒนาเป็นวัคซีนและชุดตรวจวินิจฉัยโรค จากการที่โปรตีน VP1 มีส่วนเป็นพิษต่อ Escherichia coli ซึ่งเป็นเซลล์เจ้าบ้าน จำนวน 60 กรดอะมิโน ที่ปลาย N-terminal จึงเป็นข้อจำกัดทำให้ผลิตโปรตีน VP1 ได้ในปริมาณน้อย นอกจากนี้ยังมีโปรตีน VP2 ซึ่งเป็นโปรตีนไม่ใช่โปรตีนโครงสร้างมีบทบาทสำคัญในการช่วยในการม้วนพับของโปรตีน VP1 ทำให้เกิดโครงสร้างอิพิโทปของไวรัสที่เหมาะสม จุดประสงค์ในงานวิจัยนี้เพื่อผลิตรีคอมบิแนนท์โปรตีน VP1 และ VP2 และการผลิตแอนติบอดีในหนูไมซ์ ด้วยการตัดส่วนเป็นพิษต่อเซลล์เจ้าบ้านออก จำนวน 60 กรดอะมิโน ที่ปลาย N-terminal (Δ60N_VP1) แล้วเชื่อมต่อกับดีเอ็นเอ VP2 จึงได้รูปแบบของดีเอ็นเอต่างๆ ดังนี้ Δ60N_VP1, VP2, VP2/Δ60N_VP1 และ Δ60N_VP1/VP2 ดีเอ็นเอทั้ง 4 รูปแบบได้ถูกโคลนเข้าสู่เวคเตอร์ pET28a(+) และชักนำเกิดการแสดงออกใน E.coli สายพันธุ์ Roseta-gami โดยใช้ IPTG ความเข้มข้น 0.2-0.3 มิลลิโมลาร์ ที่อุณหภูมิ 25 องศาเซลเซียส เป็นเวลา 3 ชั่วโมง รีคอมบิแนนท์โปรตีนทั้งหมดได้ถูกทำให้บริสุทธิ์ด้วยวิธี affinity chromatography ซึ่งขนาดโปรตีนของ Δ60N_VP, VP2, VP2/Δ60N_VP1 และ Δ60N_VP1/VP2 ดังนี้คือ 45, 28, 73 และ 85 กิโลดาลตัน ตามลำดับ ด้วยคุณสมบัติในการเป็นแอนติเจนที่ดีของโปรตีน Δ60N_VP1 จึงได้นำมาใช้สำหรับตรวจหาแอนติบอดีต่อเชื้อไวรัส CAV จากซีรั่มไก่ จำนวน 152 ตัวอย่างด้วยวิธี indirect ELISA โดยพบให้ความไว ความจำเพาะ และความแม่นยำ เท่ากับ 87.50%, 95.31% และ 90.79% ตามลำดับ นอกจากนี้ยังพบว่าภายหลังการนำโปรตีน Δ60N_VP1 ไปฉีดกระตุ้นในหนูไมซ์ พบว่าหนูไมซ์มีการตอบสนองและผลิตพอลิโคลนอลแอนติบอดีที่มีความจำเพาะต่อโปรตีน Δ60N_VP1 ได้ ดังนั้นโปรตีน Δ60N_VP1 จึงเป็นแอนติเจนที่เหมาะสมสำหรับนำไปใช้พัฒนาวัคซีนและแอนติบอดีต่อโปรตีน Δ60N_VP1 ยังสามารถนำไปประยุกต์ใช้ตรวจหาเชื้อไวรัส CAV ได้ต่อไป

  • BIP!
    Impact byBIP!
    selected citations
    These citations are derived from selected sources.
    This is an alternative to the "Influence" indicator, which also reflects the overall/total impact of an article in the research community at large, based on the underlying citation network (diachronically).
    0
    popularity
    This indicator reflects the "current" impact/attention (the "hype") of an article in the research community at large, based on the underlying citation network.
    Average
    influence
    This indicator reflects the overall/total impact of an article in the research community at large, based on the underlying citation network (diachronically).
    Average
    impulse
    This indicator reflects the initial momentum of an article directly after its publication, based on the underlying citation network.
    Average
Powered by OpenAIRE graph
Found an issue? Give us feedback
selected citations
These citations are derived from selected sources.
This is an alternative to the "Influence" indicator, which also reflects the overall/total impact of an article in the research community at large, based on the underlying citation network (diachronically).
BIP!Citations provided by BIP!
popularity
This indicator reflects the "current" impact/attention (the "hype") of an article in the research community at large, based on the underlying citation network.
BIP!Popularity provided by BIP!
influence
This indicator reflects the overall/total impact of an article in the research community at large, based on the underlying citation network (diachronically).
BIP!Influence provided by BIP!
impulse
This indicator reflects the initial momentum of an article directly after its publication, based on the underlying citation network.
BIP!Impulse provided by BIP!
0
Average
Average
Average
Upload OA version
Are you the author of this publication? Upload your Open Access version to Zenodo!
It’s fast and easy, just two clicks!