O estudo avaliou o potencial de produção de etanol de quatro cultivares industriais de mandioca, considerando a influência da idade de colheita e dois métodos de quantificação de glicose no rendimento de bioetanol. A pesquisa adotou abordagem experimental e quantitativa, analisando teores de glicose e coeficientes de hidrólise enzimática em amostras colhidas aos 12 e 15 meses. Utilizaram-se dois métodos de quantificação: o glicosímetro Accu-Chek® Guide Me e cálculos baseados no coeficiente de hidrólise. Os resultados indicaram que tanto a idade de colheita quanto o método de quantificação afetaram significativamente o rendimento de etanol, sendo observados maiores teores de glicose em amostras colhidas aos 15 meses e avaliadas pelo método direto. Os cultivares BRS Formosa e BRS Mulata apresentaram o maior potencial para produção de bioetanol, destacando-se como alternativas promissoras no setor bioenergético. O estudo concluiu que a escolha do cultivar, aliada à definição da idade ideal de colheita e à aplicação de métodos de quantificação precisos, otimiza o processo de produção de bioetanol, tornando-o mais eficiente e sustentável. Estes achados forneceram dados inéditos e práticos para a seleção de variedades de mandioca e contribuem para o desenvolvimento de um ciclo produtivo mais sustentável e economicamente viável.