A seleção de genótipos tolerantes ao déficit hídrico pode beneficiar a cultura do tomateiro favorecendo maiores produtividades. O objetivo do trabalho foi avaliar a potencialidade de solução osmótica de manitol como simulador de deficiência hídrica para seleção de genótipos de tomateiro. Adotou-se o delineamento inteiramente casualizado (DIC) com quatro repetições. Avaliou-se a melhor concentração de manitol capaz de identificar dois genótipos contrastantes (acesso selvagem LA-716, pertencente a espécie Solanum pennelliie cv. Santa Clara) tolerante e suscetível ao estresse hídrico, respectivamente. O potencial osmótico de -0,3 MPa obtido a partir da utilização de 22,29 g L-1 de manitol apresentou maior eficiência para seleção de genótipos do tomateiro. Esta concentração foi utilizada para seleção em sete genótipos segregantes F2RC1, provenientes de cruzamento interespecífico (S. pennellii versus S. lycopersicum) comparando com a testemunha resistente, acesso selvagem LA-716 e suscetível, cv. Santa Clara. O genótipo UFU80 - F2RC1#1 se destacou entre os demais, sendo superior em relação à testemunha suscetível ao déficit hídrico. O potencial osmótico de -0,3 MPa obtido por manitol foi eficiente na seleção indireta de genótipos segregantes de tomateiro tolerantes ao déficit hídrico.