RESUMENObjetivos. Determinar la seroprevalencia de Neospora caninum en ganado lechero sin vacunar del altiplano Norte de Antioquia. Materiales y métodos. Se realizó un estudio transversal para determinar la prevalencia de neosporosis en bovinos de la principal zona lechera antioqueña. En Mayo-Junio del 2014 se recolectaron muestras de sangre de 1003 bovinos en 29 hatos ubicados en el municipio de San Pedro de los Milagros, en Antioquia. Los niveles de anticuerpos de N. caninum se midieron mediante un kit de inmunoensayo enzimático (ELISA) y los resultados se clasificaron como positivos o negativos. Resultados. Se observaron bovinos seropositivos en todos los hatos, con una prevalencia entre el 7 y 97%, y una media (±SE) del 37.1% (±4.2). La distribución de los animales seropositivos por grupos de <1, 1-2, 2-3 y ≥3 años de edad fue del 25.5, 30.3, 46.1 y 39.1%, respectivamente. Conclusiones. Se detectó una alta tasa de seroprevalencia de N. caninum en la principal zona de ganado lechero de Antioquia. La gran variación entre hatos apunta a que existen factores de riesgo cuya identificación sería esencial a la hora de instaurar programas de control. En vista de que cualquier vaca seropositiva tiene un mayor riesgo de abortar que congéneres no infectados, los próximos estudios deberían abordar la epidemiología de abortos atribuible a neosporosis previo a establecer cualquier plan de control.