El incremento de cepas patógenas resistentes a fármacos convencionales ha limitado las opciones de tratamiento médico. Ante ello surge la necesidad de buscar alternativas terapéuticas. Muchas especies vegetales poseen un enorme potencial antimicrobiano que puede ser de gran utilidad. Objetivo: determinar el efecto antibacteriano in vitro del extracto etanólico de Annona muricata L. sobre Staphylococcus aureus, Streptococcus B – hemolíticos y Escherichia coli. Métodos: se evaluaron 135 unidades experimentales conformadas por 3 cepas de Staphylococcus aureus, Streptococcus B-hemolíticos y Escherichia coli, además de 5 concentraciones del extracto y 3 repeticiones del experimento. Para determinar el efecto antibacteriano in vitro se emplearon los métodos de disco difusión en agar y macrodilución en caldo. Se utilizó el extracto etanólico a concentraciones de 125, 250, 500, 750, 1000 mg/ml y solución salina fisiológica estéril como control negativo. Resultados: el extracto inhibió el crecimiento in vitro de Staphylococcus aureus y Streptococcus B-hemolíticos. La mayor inhibición se observó a 1 000 mg/ml con halos inhibitorios de 14,6 mm y 12,33 mm de diámetro, respectivamente. Para Escherichia coli no se observó la formación de halos inhibitorios. Las cepas de Streptococcus B-hemolíticos y Staphylococcus aureus presentaron una concentración mínima inhibitoria de 250 y 500 mg/ml, respectivamente. Conclusión: el efecto antibacteriano in vitro fue directamente proporcional a cada concentración empleada sobre Staphylococcus aureus y Streptococcus B-hemolíticos. En el caso Escherichia coli no se observó inhibición de crecimiento.